Ref pf1201-k ivd para uso diagnóstico in vitro pathfasttm presepsin



Descargar 96.93 Kb.
Fecha de conversión26.06.2018
Tamaño96.93 Kb.

PF1201-K Presepsin MCM ver 1


2011.02

REF PF1201-K  IVD    Para uso diagnóstico in vitro
PATHFASTTM Presepsin



60 Pruebas

Uso previsto

PATHFAST Presepsin es un inmunoensayo enzimático de quimioluminiscencia in vitro para la determinacion cuantitativa de la concentración de presepsin (sCD14-ST) en sangre total o plasma. PATHFAST Presepsin se utiliza como ayuda en el diagnóstico y pronóstico de la sepsis, en la valoración de la gravedad en la sepsis, y como asistencia en la estratificación de riesgo de pacientes con sepsis en estado crítico.

Characteriticas


CD14 es una glicoproteína de superficie de membrana de monocitos/macrófagos (mCD14) que actúa como receptor de complejos de lipopolisacáridos y de la proteína de unión de LPS (LPBP). La mCD14 se localiza junto al receptor tipo toll 4 (TLR4). Una vez que el complejo LPBP se ha unido, la CD14 activa la cascada de señalización proinflamatoria específica del TLR4, iniciando la reacción inflamatoria del huésped frente a los agentes infecciosos. El complejo formado por LPS-LPBP-CD14 entra en la circulación liberando la CD14 de la membrana celular produciendo CD14 soluble (sCD14). Sin embargo, la actividad de la proteasa del plasma genera otra partícula de la sCD14 denominada subtipo de sCD14 (sCD14-ST). Sin embargo, la actividad de la proteasa del plasma genera otra molécula de la sCD14 denominada subtipo de sCD14 (sCD14-ST) o presepsin1). Los niveles de presepsin fueron significativamente más elevados en los pacientes con sepsis que en los pacientes con SIRS (síndrome de respuesta inflamatoria sistémica) o que los individuos aparentemente sanos1)2). El mecanismo de secreción de la presepsin está relacionado con el proceso de fagocitosis y la ruptura con enzimas lisosómicos de microorganismos3). En un modelo de ligación y punción cecal (CLP) de conejo, los niveles de presepsin aumentaron antes que los de IL-6 y dímero-D junto con la aparición de bacterias en sangre4).

La determinación de la concentración de presepsin se puede utilizar, no sólo para el diagnóstico y pronóstico de la sepsis, sino también para controlar la trayectoria de la enfermedad y las respuestas a las intervenciones terapéuticas5)6).

PATHFAST Presepsin es un inmunoensayo enzimático por quimioluminiscencia (CLEIA) para la medición cuantitativa de la concentración de presepsin. En el ensayo se utilizan anticuerpos monoclonales y policlonales que reconocen la presepsin. Todos los componentes necesarios están en un cartucho de reactivo. Utilizando el analizador PATHFAST, la concentración de presepsin se puede determinar en 17 minutos.


Notas importantes:

Antes de tomar medidas relevantes, los resultados obtenidos de este ensayo han de considerarse siempre junto con los análisis clínicos, el historial médico del paciente, y cualquier otro indicio encontrado.


Composición del paquete


Cartucho de reactivo 6 cartuchos x 10 bandejas

El cartucho de reactivo consta de 16 pocillos. Todos los pocillos excepto el pocillo de la muestra (nº 1) y el pocillo de recuento (n° 10) están cubiertos con un sello de aluminio con códigos de barra en él. Todos los reactivos necesarios para la prueba están incluidos en cada pocillo del cartucho de reactivo.


Pocillos forma Ingrediente Cantidad Fuente

# 1 Vacío pocillo de muestra

# 2 líquido Fosfatasa alcalina 50μl Microorganismo

AcPo * conjugado

anti presepsin Conejo

Tampón MES**

Azida sódica < 0,1%

# 7 líquido Partículas magnéticas 50μl Ratón

revestidas con AcMo**

anti presepsin

Tampón MES***

#13 líquido Sustrato

quimioluminiscente 100μl

CDP-Star®

# 11 líquido Tampón de dilución

de la muestra 25μl

Tampón Tris

Azida sódica < 0,1%

# 3,4,5 líquido Tampón de lavado 400μl    

Tampón MOPS****



Azida sódica < 0,1%

*AcPo = Anticuerpo policlonal

**AcMo = anticuerpo monoclonal

***MES = ácido 2-morfolinoetanosulfónico, monohidratado

****MOPS= ácido 3-morfolinopropanosulfónico

Los Nºs 1,6,8,9,10,12,14,15,16 son pocillos vacíos.

CDP-Star® es una marca registrada de Applied Biosystems.
Calibradores


  1. Calibrador 1 (CAL-1) 2 x 1,2 ml (solución lista para usar)

  2. Calibrador 2 (CAL-2) 2 x liofilizado para 1,2 ml

  3. Diluyente del calibrador 2 x 1,2 ml (líquido)

Azida sódica (0,05%)
TARJETA DE INTRODUCCIÓN DE CM 1 hoja
Instrucciones de uso 1 hoja
Hoja de datos de control 1 hoja


Materiales necesarios pero no suministrados

Analizador PATHFAST® y consumibles

Materiales de control de calidad de Presepsin



Principio del ensayo


El principio de ensayo de PATHFAST Presepsin se basa en un CLEIA no competitivo combinado con la tecnología *MAGTRATION. Durante la incubación de la muestra con partículas magnéticas revestidas de anticuerpo policlonal presepsin y anticuerpo monoclonal presepsin marcadas con fosfatasa alcalina, la presepsin de la muestra se une a los anticuerpos anti presepsin formando un inmunocomplejo con partículas magnéticas revestidas de anticuerpo y anticuerpo marcadas con enzima. Después de retirar las sustancias no unidas mediante la tecnología *MAGTRATION, se añade un sustrato quimioluminiscente. Después de una corta incubación, se mide la intensidad de la luminiscencia generada por la reacción enzimática. La intensidad de la luminiscencia está relacionada con la concentración de presepsin de la muestra, la cual se calcula mediante una curva estándar.

*MAGTRATION® es una tecnología de separación unido/libre (B/F) en la que se lavan partículas magnéticas en la punta de la pipeta y es una marca registrada de Precision System Science.


Precauciones

Cartucho de reactivos


  1. No reutilice un cartucho de reactivo. Está diseñado para un solo uso.

  2. No despegue el sello de aluminio.

  3. Manipule el cartucho de reactivo cogiéndolo por el borde y no toque el sello de aluminio ni el pocillo negro con los dedos.

  4. Evite la contaminación de saliva en el pocillo negro.

  5. No utilice el cartucho de reactivo cuando caiga y se dañe.

  6. Después de un tiempo determinado de conservación o transporte, puede haber algún reactivo adherido a la lámina de aluminio Si se observa esta circunstancia, golpee suavemente el cartucho sobre la mesa antes de usarlo.

  7. Evite la contaminación y la exposición a la luz directa del sol.

  8. Los cartuchos de reactivos usados contienen fluidos corporales humanos. Manipúlelos con las debidas precauciones para evitar el contacto con la piel e infiltraciones.

  9. No utilice los reactivos pasada su fecha de caducidad.

  10. No utilice ningún cartucho de reactivo que se haya mantenido a temperatura ambiente.

  11. Deséchelo de acuerdo con las normas aplicables de las instituciones nacionales y locales. Siga precauciones generales y manipule todos los componentes como si pudieran transmitir agentes infecciosos.



Instrucciones de conservación


Consérvese a una temperatura entre+2 y +8°C. No abra la bandeja de cartuchos antes de su uso.

Caducidad


La fecha de caducidad se indica en el cartucho de reactivo y en el envase de reactivos.

Obtención y preparación de las muestras


  1. Use sangre total o plasma recogidos con tubos de recolección adecuados que contengan heparina o EDTA. No utilice suero.

  2. Las muestras de sangre total deben analizarse dentro de las 4 horas siguientes a la recogida. Inmediatamente antes de verter una muestra de sangre total en un pocillo de muestra de un cartucho, mézclese suavemente la muestra de sangre total contenida en un tubo de recogida de sangre (no use un agitador vórtex). El ensayo debe comenzar inmediatamente después de verter la muestra de sangre y cargar el cartucho en el PATHFAST.

  3. Debe comprobarse que no hay extensiones o coágulos de fibrina u otros materiales insolubles en la muestra, de otro modo, dicho material debe eliminarse por centrifugación o filtración.

  4. Las muestras de plasma son estables durante 3 días a temperaturas entre +2 y +8 °C y 2 meses a una temperatura de –20 °C o inferior. En caso de no realizar los análisis en el plazo de tres días, las muestras de plasma se pueden almacenar a una temperatura de -20ºC o inferior. Sin embargo, las muestras congeladas no deben congelarse y descongelarse repetidamente antes de la prueba.

  5. Mezcle suavemente las muestras (no use un agitador vórtex).

  6. Antes de procesar las muestras, mezcle y luego centrifugue a 2500 – 3000 x g durante 10 minutos todas las muestras previamente congeladas y las conservadas durante más de 12 horas.



Ejecución del test


Preparación de los reactivos

  1. Cartucho de reactivos: Listo para usar.

  2. Calibrador -1 (CAL-1): Listo para usar.

  3. Calibrador -2 (CAL-2):

Reconstituya cada vial de CAL-2 con un frasco de diluyente de calibrador. El calibrador reconstituido es estable durante 24 horas a temperaturas entre +2 y +8ºC y 6 meses a -20ºC o menos. Evite más de seis ciclos de congelación/descongelación.
NOTA:

  1. Use el mismo lote de CAL-1, CAL-2, diluyente del calibrador y cartucho de reactivo de PATHFAST. Nunca mezcle diferentes lotes de CAL-1, CAL-2, diluyente del.

  2. El CAL-2 contiene albúmina sérica bovina. Manipúlelo con las debidas precauciones para evitar el contacto con la piel.

Instalación de la curva de calibración maestra



  1. Cuando se use un nuevo lote de reactivos es necesario instalar la curva de calibración maestra .

  2. Instale la curva de calibración maestra leyendo el código de barras en la TARJETA DE INTRODUCCIÓN DE CM, que se incluye en cada paquete, con el lector manual de código de barras del PATHFAST. Consulte el manual del usuario del PATHFAST para más información.



Calibración por el usuario

Consulte el manual del usuario del PATHFAST.



  1. Es necesaria la calibración por el usuario cuando se usa un nuevo lote de reactivos después de la instalación de la curva de calibración maestra en la TARJETA DE INTRODUCCIÓN DE CM.

  2. La calibración por el usuario es también necesaria cada cuatro semanas después de la primera calibración por el usuario (no es necesaria la TARJETA DE INTRODUCCIÓN DE CM).

  3. Los calibradores, CAL-1 y CAL-2, deben estudiarse ambos por duplicado. Por tanto, para la calibración por el usuario son necesarios cuatro cartuchos de reactivo, dos para CAL-1 y dos para CAL-2.

  4. Disponga los cartuchos de reactivo en el bastidor de cartuchos, luego vierta aproximadamente 100 μl de CAL-1 y CAL-2 en los pocillos de muestra para cargarlos en el PATHFAST.

  5. Realice la calibración por el usuario de acuerdo con el manual del usuario del PATHFAST.


Ensayo de Control de Calidad (Ensayo CC)

  1. Consulte el manual del usuario del PATHFAST. Se realiza un ensayo CC después de cada calibración para comprobar las curvas de calibración y obtener los datos de las muestras de CC para el control de calidad. Un ensayo de CC es indispensable para asegurar la validez de los resultados con muestras. Después de cada calibración, con cada nuevo envío de kits de pruebas previamente calibrados, o siempre que el centro desee verificar el rendimiento del sistema, analice dos niveles de material de control de calidad con concentraciones de presepsin (sCD14-ST).

  2. Las buenas prácticas de laboratorio recomiendan el uso de controles de calidad adecuados. Se recomienda seguir las directrices federales, estatales y locales para el control de calidad. Si los controles no rinden como se esperaba, no use los resultados de la prueba. Repita la prueba o llame a su distribuidor autorizado de PATHFAST para asistencia técnica.


Ensayo de la muestra

  1. Use como muestra sangre total heparinizada o con EDTA o plasma.

  2. Disponga el cartucho de reactivos en el bastidor de cartuchos, luego dispense aproximadamente 100 μl de muestra en un pozo de muestra de un cartucho para cargar el bastidor en el PATHFAST.

  3. Realice el ensayo de acuerdo con el manual del usuario del PATHFAST.


Nota :

  1. Cuando se usa sangre total, antes de verterla, es necesario mezclar suavemente la sangre contenida en el tubo de recogida de sangre (no utilice un agitador vórtex). El ensayo debe comenzar inmediatamente una vez se haya pipeteado la muestra de sangre entera y se haya cargado el cartucho en el PATHFAST.

  2. Cuando las muestras de sangre total o plasma se dejan durante más de 5 minutos después de pipetear en un pocillo de muestras, se obtendrá un resultado menor al analizar la sangre entera debido a la sedimentación de la sangre y se obtendrá un resultado mayor al analizar el plasma debido al incremento de la concentración de presepsin por la evaporación.

  3. Cuando se usa sangre total, es opcional introducir el valor individual de hematocrito de la muestra en el PATHFAST. Consulte el manual del usuario del PATHFAST.

  4. Las muestras con resultados mayores de 20,000 pg/ml deben diluirse con el diluyente de muestra (Producto nº PF01D) y volverlas a analizar si se desea un resultado cuantitativo, aunque también pueden considerarse como > 20,000 pg/ml.



Valores teóreticos

Intervalo de referencia

Estudio-1: El intervalo de referencia de la presepsin es independiente de la edad y el sexo. La concentración de presepsin se determinó en muestras de plasma con EDTA de 230 individuos aparentemente sanos.



Edad

Sexo

Estudio-2: Estudio realizado con 119 muestras de plasma con EDTA de individuos aparentemente sanos. Los valores de presepsin oscilaron entre 60 y 365 pg/ml con una media aritmética de 160 pg/ml; IC 95% (148 -171 pg/ml). El percentil 5 fue de 92pg/ml (IC 95%, 79-100 pg/ml) y el percentil 95 fue 320pg/ml (IC 95 % , 233-363 pg/ml). El análisis ROC reveló un valor de corte de 337 ppg/ml para discriminar entre individuos sanos y pacientes con sepsis.





Nota :

Los valores teoreticos/de referencia pueden variar de un laboratorio a otro y de un país a otro dependiendo de diversos factores. Por tanto, es recomendable que cada institución establezca sus correspondientes valores de referencia. Recomendamos que cada laboratorio determine sus propios intervalos de referencia. Los niveles de presepsin son elevados en infecciones microbianas clínicamente relevantes, y siguen aumentando según el incremento de la gravedad de la enfermedad3)5). Sin embargo, en función de los individuos, el mismo foco de la infección puede relacionarse con diferentes aumentos de la concentración de presepsin como expresión de diferentes respuestas inmunes individuales y de diferentes situaciones clínicas. Por tanto, los médicos deben utilizar los resultados de la presepsin junto con cualquier otro dato de laboratorio y los indicios clínicos del paciente, e interpretar los valores en el contexto de la situación clínica del paciente. Los valores de referencia se dan por tanto, con fines únicamente orientativos.


Capacidad de pronóstico de la presepsin

En aquellos pacientes que en la presentación mostraron indicios de sepsis y que desarrollaron la sepsis, los valores de presepsin se determinaron en el momento inicial y se compararon con la mortalidad a 30 días. El análisis de supervivencia de Kaplan-Meier en el plazo de 30 días tras la admisión en el hospital, mostró que los pacientes con valores de presepsin en el cuartil más alto (>1,858 pg/ml) tenían un riesgo de mortalidad > 60% (p=0,0005). Mientras que los pacientes con valores de presepsin en los cuartiles más bajos tenían una mortalidad más baja del 20%.





La figura siguiente muestra los resultados del análisis ROC referentes al pronóstico de la mortalidad utilizando los valores de presepsin en el momento inicial, a las 24 horas y a las 72 horas desde la presentación. La capacidad de pronóstico de la presepsin al inicio y a las 72 horas desde la presentación es similar (AUC = 0,929).





Datos específicosde funcionamiento del test

A continuación se ofrecen datos de representativos funcionamiento de las pruebas en los analizadores en el PATHFAST Presepsin.
  1. Intervalvo de medición: 20-20,000 pg/ml


  2. Correlación entre sangre total y plasma en PATHFAST.

y = 1,04 x – 10,8; r = 0,986; n = 104 (y: sangre total EDTA, x: plasma EDTA)

y = 1,02 x + 28,6; r = 0,980, n = 104 (y: sangre total heparinizada, x: plasma EDTA)

y = 1,01 x + 26,9; r = 0,983, n = 104 (y: plasma heparinizado, x: plasma EDTA)


  1. Estandarización

Los calibradores para PATHFAST Presepsin se asignan por análisis de aminoácidos10).

  1. Imprecisión

La reproducibilidad se determinó usando este método, cuatro materiales de control en un protocolo como sigue: Se estudiaron cuatro muestras de plasma por duplicado durante 20 días no consecutivos. Las desviaciones estándar dentro de cada realización y totales, así como los coeficientes de variación se calcularon según el documento del NCCLS EP5-A2 [ISBN 1-56238-542-9]. Se obtuvieron los siguientes resultados;








Precisión dentro de cada prueba

Precisión total

Muestra


Media

(pg/ml)


D.E.

(pg/ml)


C.V.

(%)


D.E.

(pg/ml)


C.V.

(%)


QC-LL

445

19,8

4,4%

19,4

4,4%

QC-L

882

25,9

2,9%

35,0

4,0%

QC-M

4,801

154

3,2%

183

3,8%

QC-H

19,292

753

3,9%

956

5,0%
  1. Limite inferior de detectión: < 20,0 pg/ml


El limite de detection representa el menor nivel de analito que se puede distinguir de cero. Se calcula como el valor que se encuentra dos desviaciones estándar por encima del calibrador cero.

  1. Límite de cuantificación: < 57,1 pg/ml

El límite de cuantificación es la menor concentración de analito que puede medirse de forma reproducible con un coeficiente de variación entre pruebas del 10 %.

  1. Efecto gancho de la dosis alta

Ninguno hasta 4,000,000 pg/ml

  1. Especificidad analítica

Las siguientes sustancias no tienen reactividad cruzada significativa sobre el ensayo a la concentración indicada entre paréntesis en el ensayo PATHFAST Presepsin.
sCD14 (4,0 ug/ml) No detectable


Posibles interferencias

Se observó que las siguientes sustancias, a las concentraciones indicadas en la lista, interferían en el ensayo menos del 10%.


Sustancia interferente

Concentración no interferente

Bilirrubina libre

40 mg/dl

Bilirrubina conjugada

40 mg/dl

Triglicéridos

1,000 mg/dl

Hemoglobina (hemólisis)

600 mg/dl

Factor reumatoide

500 UI/ml

Acetaminofeno

20 mg/dl

Ácido acetilsalicílico

65,2 mg/dl

Alopurinol

4,0 mg/dl

Ampicilina

5,3 mg/dl

Ácido ascórbico

6,0 mg/dl

Atenolol

1,0 mg/dl

Cefina

10 mg/dl

Captopril

5,0 mg/dl

Digoxina

0,61 ug/dl

Dopamina

65 mg/dl

Eritromicina

20 mg/dl

Furosemida

6,0 mg/dl

Metildopa

2,5 mg/dl

Nifedipina

6,0 mg/dl

Fenitoína

10 mg/dl

Teofilina

25 mg/dl

Verapamilo

16 mg/dl

Proteína (Albúmina)

6 g/dl

Imipenem

2,0 mg/dl

Cefotaxima

200 mg/dl

Vancomicina

4,0 mg/ml

Noradrenalina

4,0 ug/ml

Dobutamina

25 ug/ml

Heparina

100 UI/ml

EDTA

2,0 mg/ml


Limitaciones del procedimiento

  1. El sistema de información del aparato contiene códigos de error para advertir al operador sobre problemas de funcionamiento específicos. Consérvese todas las hoja de informes con dichos errores para su seguimiento. Véase el manual del usuario del PATHFAST.

  2. Las muestras de pacientes pueden contener anticuerpos heterófilos que podrían afectar a los inmunoensayos dando un resultado falsamente elevado o reducido. Este ensayo ha sido diseñado para reducir al mínimo la interferencia de anticuerpos heterófilos. No obstante, no puede garantizarse la eliminación completa de esta interferencia de todas las muestras de pacientes. Un resultado de la prueba que sea incoherente con el cuadro clínico y la historia clínica del paciente debe interpretarse con precaución.

  3. Los resultados del PATHFAST Presepsin deben ser evaluados en el contexto de todos los datos de laboratorio de los que se disponga y del estado clínico total del paciente. En los casos en los que los resultados de laboratorio no concuerden con la perspectiva clínica o con el historial, se deben llevar a cabo pruebas adicionales.



Bibliografía

  1. Shirakawa K, Naitou K, Hirose J, Takahashi T, Furusako S. Establishment of one-step ELISA detecting Presepsin (sCD14-ST): a new marker for sepsis. Clin Chem Lab Med. 2010 Submitted for publication

  2. Yaegashi Y, Shirakawa K, Sato N, Suzuki Y, Kojika M, Imai S, Takahashi G, Miyata M, Furusako S, Endo S. Evaluation of a newly identified soluble CD14 subtype as a marker for sepsis. J Infect Chemother. 2005 Oct; 11(5): 234-8

  3. Naitoh K, Shirakawa K, Hirose J, Nakamura M, Takeuchi T, Hosaka Y, Furusako S, The new sepsis marker, sCD14-ST (PRESEPSIN), induction mechanism in the rabbit sepsis models. SEPSIS 2010: P19

  4. Nakamura M, Takeuchi T, Naito K, Shirakawa K, Hosaka Y, Yamasaki F, Furusako S. Early elevation of plasma soluble CD14 subtype, a novel biomarker for sepsis, in a rabbit cecal ligation and puncture model. Critical Care 2008, 12(Suppl 2) :P194 (doi: 10.1186/cc6415)

  5. Kojika M, Takahashi G, Matsumoto N, Kikkawa T, Hoshikawa K, Shioya N, Shibata S, Suzuki Y, Aoki H, Shirakawa K, Endo S. Serum levels of soluble CD14 subtype reflect the APACHE II and SOFA Scores. Medical Postgraduates 2010 Jan; 48(1): 46-50

  6. Takahashi G, Suzuki Y, Kojika M, Matsumoto N, Shozushima T, Makabe H, Yamada Y, Shioya N, Shibata S, Shirakawa K, Endo S. Evaluation of responses to IVIG therapy in patients with severe sepsis and septic shock by soluble CD14 subtype monitoring. Medical Postgraduates 2010 Jan; 48(1): 19-24

  7. The results of Japanese clinical study for PATHFAST Presepsin

  8. The results of Europian clinical sudy for PATHFAST Presepsin

  9. Bone RC, Balk RA, Cerra FB, Dellinger RP, Fein AM, Knaus WA, Schein RM, Sibbald WJ. Definitions for sepsis and organ failure and guidelines for the use of innovative therapies in sepsis. The ACCP/SCCM Consensus Conference Committee. American College of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine. Chest. 1992 Jun;101(6):1644-55

  10. The Japanese Pharmacopoeia Fifteenth Edition (JP15): Supplement II, Amino Acid Analysis of Proteins, 1814-1822

Símbolos





CE Conformidad con la UE
IVD Para uso diagnóstico in vitro
Lot Código de lote
REF Número de producto



Fabricado por


EC

REP

Representante autorizado



Contiene suficiente para



Limitación de temperatura



Usar antes de



Precaución, consúltense los

documentos acompañantes





Consúltense las Instrucciones de

uso





Calibrador 1



Calibrador 2



Diluyente

Cartucho de reactivo





   Ficha de introducción para la

curva maestra de calibración




Hoja de datos para control

*PATHFASTTM es una marca comercial o marca registrada en EEUU, la UE, Corea, China, Taiwán y Hong Kong de Mitsubishi Chemical Medience Corporation.



Mitsubishi Chemical Medience Co.

4-2-8, Shibaura, Minato-ku, Tokyo 108-8559 JAPÓN



Mitsubishi Chemical Europe GmbH


Willstaetterstr 30, 40549 Dusseldorf,

Alemania



YM-PBB-AAA3012500r1

- -


Compartir con tus amigos:


La base de datos está protegida por derechos de autor ©composi.info 2017
enviar mensaje

    Página principal