Manual de Prácticas



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TOXICOLOGIA

Manual de Prácticas de Laboratorio

Programa Educativo de Licenciado en Biología

Febrero-Agosto 2010

Universidad Veracruzana

Facultad de Ciencias Biológicas y Agropecuarias

Región: Orizaba-Córdoba
Antonio Pérez Pacheco

Autor:
Dr. Antonio Pérez Pacheco

Alumnos participantes:

Eduardo Padilla Cuéllar

Edith Blanco Rodríguez

PRÓLOGO


El presente manual es la recopilación de una serie de experimentos realizados como parte de las actividades de investigación del Laboratorio de Toxicología de la F.C.B.A. U.V., el cual recoge las experiencias de académicos y estudiantes de nivel licenciatura y posgrado que han realizado tesis, estancias o prestado un servicio social en este departamento.
El manual comprende 12 prácticas generales de la experiencia educativa de Toxicología ambiental del P.E. De Licenciado en Biología.
El desarrollo de cada práctica implica la interacción de técnicas de muchas áreas de las Ciencias Naturales como lo son la Microbiología, Citología, Genética, Bioquímica, Química Analítica, Fisiología, Farmacología, Histopatología, Higiene, Fitoquímica, Mecánica y Bioética ya que la propia disciplina de la Toxicología es integrativa y requiere de diversos conocimientos técnicos y prácticos de las áreas ya mencionadas.
Esperando que el interés por el mundo de la Toxicología les sea de su agrado no me resta más que desearles que disfruten las siguientes páginas.

El Autor


Contenido



  1. Material y equipo empleado en el laboratorio de toxicología

  2. Identificación de los reactivos empleados en el laboratorio de toxicología

  3. Muestreo biológico de tóxicos

  4. Determinación de AAS en orina

  5. Determinación de flavonoides

  6. Determinación de THC usando el reactivo de Duquenois

  7. Identificación de tóxicos en leche

  8. Tóxicos en suelos

  9. Identificación de tóxicos en frutos

  10. Identificación de sustancias tóxicas (alcaloides)


PRÁCTICA 1

Material y Equipo empleado en el Laboratorio de Toxicología.

INTRODUCCIÓN

Es fundamental que el estudiante de Toxicología conozca la infraestructura tecnológica que tiene un laboratorio de Toxicología, ya que es en este lugar donde se lleva a cabo la experimentación animal, el análisis de muestras y la preparación de reactivos. Es importante reconocer los equipos y los materiales empleados en cada experimento, prueba o determinaciones que se emplean.



OBJETIVO:

Reconocer los principales reactivos utilizados en el laboratorio de toxicología, su clasificación y funciones.



MATERIAL:

Bitácora de laboratorio.

Cámara fotográfica.

METODOLOGÍA:

-Realizar una visita al laboratorio de Toxicología de la F.C.B.A. U.V., y ponerse en contacto con el técnico quien les explicará brevemente el uso de los equipos, cristalería y material de laboratorio; de igual forma pueden consultar la bitácora de reactivos y en base a esa información tomar fotografías, realizar esquemas o dibujos para presentar sus resultados.



RESULTADOS:

Se sugiere enlistar los resultados en un cuadro que contenga el nombre del material, su clasificación y su uso; de igual forma se sugiere realizar otra visita a otro laboratorio de toxicología para comparar los recursos tecnológicos, materiales y humanos que tenga cada laboratorio.

CUESTIONARIO

1. ¿Cómo se clasifican los materiales y equipo en el laboratorio de toxicología?

2. Escriba diferencias entre la organización de de un laboratorio y otro.

3. Describa el uso de los equipos de uso más frecuente en el laboratorio de toxicología.



PRÁCTICA 2

Identificación de los reactivos empleados en el laboratorio de toxicología

INTRODUCCIÓN

Además del recurso humano y tecnológico que se cuenta en un laboratorio de toxicología; es importante conocer los reactivos principales que se emplean en esta disciplina dependiendo para que tipo de pruebas o determinaciones se emplean.

OBJETIVO:

Reconocer los principales reactivos utilizados en el laboratorio de toxicología, su clasificación y funciones.



MATERIAL:

Bitácora de laboratorio.

Cámara fotográfica.

METODOLOGÍA:

-Realizar una visita al laboratorio de Toxicología de la F.C.B.A. U.V., y ponerse en contacto con el técnico quien les explicará brevemente el uso de los reactivos químicos y elaborados, de igual forma pueden consultar la bitácora de reactivos y en base a esa información tomar fotografías, realizar esquemas o dibujos para presentar sus resultados.



RESULTADOS:

Se sugiere enlistar los resultados en un cuadro que contenga el nombre del reactivo, su fórmula química, su clasificación y su uso; de igual forma se sugiere realizar otra visita a otro laboratorio de toxicología para comparar los recursos químicos entre uno y otro.

CUESTIONARIO

1. ¿Cómo se clasifican los reactivos en el laboratorio de toxicología?

2. Escriba diferencias entre la organización de reactivos de un laboratorio y otro.

3. Describa el uso de los reactivos de uso más frecuente en el laboratorio de toxicología.

PRÁCTICA 3

Muestreo biológico de tóxicos

INTRODUCCIÓN

El muestreo biológico o dosimetría interna consiste en la determinación cuantitativa de la concentración del tóxico o sus metabolitos en uno o más medios corporales del organismo expuesto.

Esta información se usa para estimar la exposición que experimentan cada uno de los tejidos del cuerpo, con el fin de estimar la magnitud de la exposición ambiental y para demostrar que existió una exposición efectiva. El simple hecho de que el tóxico se encuentre dentro del organismo es la prueba de que existió la exposición.

El diseño del muestreo biológico consiste en seleccionar el medio biológico que se va a muestrear, la especie química que se deberá analizar y el tiempo al que se deberá tomar la muestra. Es necesario asegurarse que las condiciones de muestreo sean las que proporcionen observaciones de valores representativos del nivel del tóxico en el organismo.

El análisis del cabello es uno de los métodos más eficaces para detectar el consumo de drogas e informar sobre el estado y el historial de dependencia de un paciente, según un estudio del Colegio Oficial de Farmacéuticos de Madrid (COFM), la Facultad de Farmacia y el Centro de Espectrometría Atómica de la Facultad de Geológicas de la Universidad Complutense de Madrid publicado en el último número de la revista científica 'Schironia'.

   Además de averiguar si un individuo está o no consumiendo drogas, este test permite distinguir los distintos perfiles de consumidores --esporádico, asiduo, crónico o no consumidor--, ya que detecta el tiempo de permanencia de la droga durante meses o años, frente a las horas de las muestras de sangre o los tres días de la orina.

   En los casos de consumo de cocaína, el análisis del cabello ofrece una fiabilidad diagnóstica del cien por cien frente a la información obtenida en las entrevistas personales. Además, permite evaluar, por ejemplo en el caso de mujeres embarazadas, el riesgo de que esta droga se incorpore al feto.

OBJETIVO: Determinar la presencia de tóxicos en orina y cabello.

MATERIAL


-Vasos de precipitados de 250 ml

-Mortero con pistilo

-Pipetas de 0.5-5 ml

-Alícuotas

METODOLOGÍA


  1. Lavar el cabello por 30 minutos a temperatura ambiente y enjuagar con agua destilada.

  2. Efectuar un segundo lavado con etanol hasta considerar la remoción.

  3. Dejar secar o ayudar a secar el etanol

  4. Pesar la masa de cabello y pulverizar.

  5. Sumergir la muestra pulverizada en 2 ml de ac. Clorhídrico. 0.1 M en baño María por un tiempo de 30 a 40 min.

  6. Medir el pH en caso de ser necesario ajustar un ph de 9 – 10 con amoniaco.

  7. Realizar una extracción con una mezcla de etanol al 20 % y cloroformo posteriormente agregar sulfato de sodio anhidro.

  8. Se parar una alícuota de 2 ml llevarlo al espectrofotómetro a 540 nm

* Nota: Se añade etanol hasta cubrir la masa de cabello

**Nota: 2 partes de etanol por 5 de cloroformo

CUESTIONARIO

1. Explique la razón por la cual se utiliza el pelo para determinar la presencia de drogas.

2. Que otros tejidos, órganos o fluidos secretados por el ser humano se pueden utilizar para este tipo de estudios.

3. Mencione 5 tipos de drogas de uso frecuente y explique la toxicocinética en el ser humano.

BIBLIOGRAFIA



http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/notas_de_microbiologia_de_los_al.htm

http://www.europapress.es/salud/noticia-analisis-cabello-permite-detectar-consumo-drogas-tipo-adiccion-estado-paciente-20080717190413.html


PRÁCTICA 4
Determinación del AAS en orina

OBJETIVO:

Determinación de Acido Acetil-Salicilico (AAS) en orina.



GENERALIDADES:

El acido acetilsalicilico se administra usualmente por vía oral, aunque puede ser administrado por vía rectal en forma de supositorios. Se absorbe rápidamente por el tracto digestivo si bien las concentraciones intragastricas y el pH del jugo gástrico afectan su absorción. La aspirina es hidrolizada parcialmente a acido salicílico durante el primer paso a través del hígado y se distribuye ampliamente por todos los tejidos del organismo.

La aspirina se une poco a las proteínas del plasma, pero debe ser administrada con precaución a pacientes tratados con fármacos que se fijan fuertemente a las proteínas del plasma, como es el caso de los anticoagulantes y antidiabéticos orales.

Después de la administración oral y dependiendo de las dosis administradas se observan salicilatos en plasma a los 5-30 minutos y las concentraciones máximas se obtienen a los 0.25-2 horas. Las concentraciones plasmáticas deben de ser de por lo menos 100 μg/ml para obtener un efecto analgésico y se observan efectos tóxicos con concentraciones superiores a 400 μg/ml. La aspirina se metaboliza en un 99% a salicilato y otros metanolitos. La semi-vida de eliminación del plasma es de 15 a 20 minutos. Los salicilatos, pero no la aspirina, experimentan una cinética de Michaelis-Menten (saturable).

En dosis bajas, la eliminación es de primer orden y la semi-vida permanece constante con un valor de 2-3 horas; sin embargo, con dosis más altas, las enzimas responsables del metabolismo se saturan y la semi-vida de eliminacion puede aumentar a 15-30 horas. Por esta razón, se requieren entre 5 y 7 días para alcanzarse unas condiciones de equilibrio ("Steady state").

Los salicilatos y sus metabolitos se eliminan principalmente por via renal, siendo excretada por la orina la mayor parte de la dosis.

Aproximadamente el 75% de la dosis se encuentra en forma de acido salicilurico, mientras que el 15% esta en forma de conjugados, sobre todo mono- y diglucuronidos. El 10% restante esta constituido por salicilato libre. La alcalinización de la orina aumenta la eliminacion de salicilato, pero no la de otros metabolitos.



MATERIAL:

· Tubos de ensaye de 13 x 100

· 1 Pipeta automática de 200 ul

· Puntillas para pipeta automática

· Gradilla

· 2 pipetas de 1ml



MATERIAL BIOLÓGICO:

· Orina.


EQUIPO:

· Espectrofotómetro



REACTIVOS:

· Agua destilada

· Reactivo de color

· Acido Fosfórico.



TECNICA:



CALCULOS:

(mg/100 ml Problema – mg/100 ml Testigo) (Factor de Dilución)

(Abs. Problema – Abs. Testigo) (Factor de Dilución)

Donde:
· Factor de Dilución: 10

· Abs. Problema: 0.085 nm.

· Abs. Testigo: 0.010 nm.

El acido acetilsalicilico se absorbe rápida y completamente. Su absorción puede variar dependiendo de la disolución del comprimido el pH y los alimentos. La vida media del acido acetilsalicilico de 15 a 20 minutos para la molécula intacta. El tiempo para la concentración máxima es de 1 a 2 horas para el acido acetilsalicilico. El acido acetilsalicilico se elimina por vía renal en forma libre y como metabolitos conjugados.


CUESTIONARIO

1. ¿Por qué a un paciente con dengue no le es conveniente consumir Ácido acetilsalicílico? ¿Qué reacción se provoca en el organismo?

2. Extrapola e interpola las diluciones y realiza los cálculos respectivos.

3. Investiga a que familia de fármacos pertenece el ácido acetilsalicíclico y que otros fármacos de importancia clínica están en la misma familia.

BIBLIOGRAFÍA

http://www.iqb.es/cbasicas/farma/farma04/a015.htm

http://www.aspirina.com/aspirina01.htm

PRÁCTICA 5



DETERMINACIÓN DE FLAVONOIDES

Introducción

Los flavonoides pertenecen a un grupo de compuestos naturales arreglados bajo un sistema C6-C3-C6, en el cual dos anillos aromáticos llamados A y B están unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo, que en caso de existir es llamado anillo C. Se conoce como 10 clases de flavonoides los cuales pueden encontrarse como aglicona o bajo la forma de glicósidos con una o tres unidades de azúcar, generalmente en los carbonos 3 y/o 7, siendo los azucares más comunes la glucosa, galactosa, ramnosa, xilosa y arabinosa. Es frecuente que diferentes azúcares se hallen unidas a una misma aglicona y en diferentes posiciones lo que hace mayor el número de glicósidos conocidos; es también común, que se encuentren en mezclas como agliconas y/o glicósidos, aun de las diferentes clases siendo esto último lo más frecuente.

Se hallan presente en todas las partes de la planta, algunas clases se encuentran más ampliamente distribuidas que otras, siendo más comunes las flavonas y flavonoles y más restringidos en su ocurrencia las isoflavonas, las chalconas y auronas.

Aunque los flavonoides han sido empleados desde mucho tiempo como colorantes de lana, se les atribuye diversas propiedades en las plantas, entre ellos podemos citar (a) protección a los vegetales contra la incidencia de rayos ultravioleta y visible, así como protección contra insectos, hongos virus y bacterias, (b) atrayentes de animales con finalidad de polinización, (c) antioxidantes, (d) control de la acción de las hormonas vegetales, (e) agentes alelopáticas y (f) inhibidora de las enzimas. Por otro lado, estos compuestos poseen también importancia farmacológica, resultado de algunas propiedades importantes atribuidas a algunos representantes de las diferentes clases, como por ejemplo, antiinflamatorio, antialérgico, antiulcerogénico, antiviral, anticarcinogénico; asimismo, son utilizados para el tratamiento de la fragilidad capilar, de la diabetes, de las afecciones cardiacas, entre otras.

Como características generales de estos compuestos debemos señalar su solubilidad en agua y etanol, su carácter fenólico y su intensa absorción en la región ultravioleta y visible del espectro debido a la presencia de sistemas aromáticos conjugados. Una clasificación preliminar del tipo de flavonoide en un extracto de planta, puede hacerse basado inicialmente en un estudio de sus propiedades de solubilidad y de comportamiento ante reacciones de color; esto, seguido por un examen cromatográfico directamente del extracto y/o del extracto hidrolizado.

En este experimento se describen los ensayos a realizar para detectar la presencia de flavonoides en un extracto a través de una sencilla reacción de coloración y una cromatografía de capa delgada utilizando agentes cromogénicos adecuados. Para el ensayo cuantitativo es usual desarrollarlo de dos maneras, por espectrofotometría ultravioleta – visible utilizando reactivo de desplazamiento para la determinación de flavonoides totales y por cromatografía líquida de alta resolución. En esta práctica se está considerando el primer método. Como material vegetal puede utilizarse la manzanilla, la ruda, especies de geranio, entre otras.



2. Procedimiento Experimental

2.1 Análisis cualitativo

A. Tratamiento de muestra:

Pese 1g de muestra seca y pulverizada en un erlenmeyer de 50 mL, añada 5mL de metanol y caliente por 10 minutos a 60°C (sí es posible hacerlo en el ultrasonido). Filtre sobre un vial (extracto A).

B. Prueba a la gota: reacción de Shinoda Coloque 20 gotas del extracto A en un tubo de ensayo (o en una placa de toque), agregue 2 a 3 virutas de Magnesio y unas gotas de ácido clorhídrico concentrado. Observe el cambio de coloración.

C. Cromatografía de capa delgada.

Utilice cromatofolio de sílica gel 60F254 (Merck) de 10 cm x 3 cm.

Aplique 30 μ del extracto A a 1cm del borde inferior. La fase móvil es acetato de etilo: metano : agua (100: 13.5: 10). Deje saturar la cámara cromatográfica (diámetro: 8cm, altura: 11cm).

Coloque la placa cromatográfica en la cámara y deje hasta que la fase móvil se mueva aproximadamente 8 cm del origen. Puede también ensayar con el sistema acetato de etilo: ácido acético. Ácido fórmico: agua (100:11:11:26).

El análisis cualitativo es muy simple de realizar. Para la cromatografía de capa delgada se prefiere utilizar los cromatofolios de aluminio, los que pueden ser adquiridos comercialmente, a fin de ahorrar tiempo, con la ventaja adicional que puede ser utilizado al momento con otras dimensiones. Los solventes utilizados son de uso común y el revelado de las placas podría ser hecho con solución etanólica de cloruro férrico de no contarse con el NP-PEG.

CUESTIONARIO.

-Investigar que derivados vegetales o animales poseen flavonoides.

-Explique ejemplos particulares en la salud y en la ecología en el que los flavonoides tienen importancia.

-

4. Bibliografía

1. Lock, O. Investigación Fitoquímica, Método en el Estudio de Productos Naturales. Fondo Editorial PUCP. Lima. 1994, pp. 114-130

2. Mabry, T.J., Markham, K.R. and Thomas, M.B., The Systematic Identification of Flavonoids. Springer-Verlag, Berlín. 1970, pp

3. Oliveira, C.M., et. al. Farmacognosia, da Planta ao Medicamento. Editora DAUFSC, Florianapolis. 1999, pp. 489-493

4. Wagner, H., Bladt, S., Zgainski, E.M., Plant Drug Analysis A Thin Layer Chromatography. Springer-Verlag, Berlín. 1996, pp

5. Park, Y., Koo, M., Ikegaki, M., Contado, J., Comparison of the flavonoid aglycone contents of Apis mellifera propolis from various regions of Brazil. Arq. Biol. Tecnol. (1997) 40 (1), 97-106.

PRÁCTICA 6

DETERMINACIÓN DE TETRAHIDROCANABINNOL USANDO EL REACTIVO DE DUQUENOIS

INTRODUCCIÓN

Prueba de Duquenosis - Levine. 200 mg. de la muestra con 25 ml. de éter de petróleo, filtrar y evaporar a sequedad en baño de maría, luego agregar 2 ml. de reactivo de Duquenosis.

Agregar 2 ml. de HCL y dejar en reposo por 10 minutos.

Observar los cambios de color. La coloración violeta es debido al flurogucinol. Trasvasar la solución a un tubo de ensayo, agregar 2 ml. de cloroformo y agitar si la marihuana está presente en la muestra el color violeta pasará a la capa orgánica.

Disolver 0.5 ml. de acetaldehído y 0.4 g. de vainillina en 20 ml. de alcohol de 95°.



OBJETIVO: Determinación de Cannabis sativa por destilación con un solvente orgánico.

MATERIAL:

· 2 Soporte Universal.

· 1 Refrigerante.

· 2 Pinza de 3 dedos.

· 1 Matraz de balón.

· 1 Mechero Bunsen.

· 1 Tripie.

· 1 Tela de Asbesto.

· 2 Mangueras.

· 1 Vaso precipitado.



REACTIVOS:

· Duquenosis.

· Cloroformo.

· Éter de petróleo.

· Benceno.

PREPARACION DE DUQUENOIS:

1.- 0.5 ml de acetaldehído mas 1 g de vainillina (extracto de vainilla) y aforar a 50 ml con alcohol etílico.



MATERIAL BIOLOGICO:

· Cannabis Sativa.



TECNICA:

1.- A una porción de material sospechoso se le agrega de 50 a 100 ml del solvente indicado (cloroformo).

2.- Se hierve hasta obtener la esencia de la hierba (extracto).

3.- Se coloca 1 ml del extracto en un tubo de ensayo se agrega de 1 a 2 ml del reactivo Duquenosis, se agita 1 minuto.

4.- Y se le añade 1 ml de acido clorhídrico concentrado este tomara si es positivo una coloración que puede ir dependiendo de la concentración rosa, violeta, verde y finalmente azul oscuro.

5.- Por último añadir de 2 a 5 gotas de cloroformo, si el color pasa a la capa clorofórmica va ser positivo.



ESQUEMA:



OBSERVACIONES Y RESULTADOS:

Al extraer el principio activo de la Cannabis sativa, y realizar las reacciones químicas al agregar los reactivos de Duquenosis, acido clorhídrico y cloroformo, se comprueba la existencia de THC en el extracto obtenido, por lo tanto el resultado obtenido de esta práctica, es positivo la presencia de Cannabis Sativa en la muestra sospechosa.



CONCLUSION: Los avances científicos y tecnológicos han posibilitado la aparición de procedimientos de purificación de los principios activos de las drogas y las síntesis de otro similares. Por otra parte por medio de la destilación se obtiene el extracto de la muestra sospechosa, por lo cual es una técnica sencilla y rápida de realizar, mostrando resultados precisos para confirmar la presencia de ciertas sustancias en la muestra a examinar.

BIBLIOGRAFIA: Enciclopedia de tecnología química. 1961. Tomo I. Editorial Unión tipográfica hispanoamericana.

México Encarta 1999.

PRACTICA 7

Identificación de tóxicos en leche

Introducción

La leche representa un alimento importante para el humano, sin embargo por las diferentes características y manejo efectuado al alimento, este es contaminado con sustancias agrícolas, tales como herbicidas, insecticidas, fungicidas y hasta medicamentos para el ganado como: antihistamínicos, antipiréticos, antibióticos y anabólicos.

Objetivo


Material

Técnica


Observaciones y resultados

Conclusión

Bibliografía

PRACTICA 8

Tóxicos en suelos

Introducción

Objetivo

Material


Técnica

Observaciones y resultados

Conclusión

Bibliografía

PRACTICA 9

Identificación de tóxicos en frutos

Introducción

Los residuos tóxicos de herbicidas, insecticidas y acaricidas fueron hallados en alimentos naturales de consumo masivo en todo el país. Hoy cada alimento parece esconder un enemigo agazapado. Mientras los padres huyen de la traicionera Scherichia coli y los vegetarianos buscan “sustitutos” de la carne, los científicos se ocupan cada vez más de los residuos de plaguicidas presentes en lácteos, granos, frutas y verduras: un mal bocado que inquieta a los grandes importadores, como la Unión Europea, Rusia y los Estados Unidos. Según los expertos, los plaguicidas viven decenas de años en la tierra y se trasladan muchas veces con los vientos o son comidos por las vacas junto con el pasto, y así entran a la cadena alimentaria hasta llegar a la leche que se consume en los hogares. Gusto amargo. Malezas, insectos, ácaros, gusanos, caracoles y hongos son algunos de los blancos preferidos de los plaguicidas, venenos con apellido (también se los llama “fitosanitarios” o “agrotóxicos”) que cuentan con ejércitos de defensores agropecuarios que invocan el uso y la dosificación responsables de las sustancias y el “período de carencia”. Esto último se refiere al tiempo que, en teoría, debe transcurrir entre la fumigación y la cosecha para que el consumo del producto no sea tóxico. El problema es que estas buenas prácticas agrícolas no siempre se cumplen. “En algunos productores rurales hay un gran desconocimiento de la normativa vigente y de los plaguicidas adecuados para cada hortaliza o fruta”, “También falta crear conciencia sobre los daños que puede causar en el medio ambiente, al acumularse en suelos y aguas, y sus efectos adversos en el ser humano, ya que muchos son cancerígenos”.

Objetivo

Identificación de agentes contaminantes en las frutas de consumo común.

Material


  • Material vegetal

  • Cetona

  • Éter de petróleo

  • Mortero con pistilo

  • Agitador

  • Matraz Erlenmeyer

  • Probeta

  • Embudo de separación

  • Vaso de precipitado

  • Soporte universal

  • Papel filtro.

Técnica


  1. Macerar las frutas o verduras que tuviésemos para la identificación.

  2. A 100 gramos del macerado, agregarle 200 ml de cetona, mezclar y agitar perfectamente por un tiempo de 2 minutos.

  3. Posteriormente filtrar en una probeta y obtener 40 ml de la mezcla filtrada.

  4. Obtenidos los 40 ml de la mezcla se le agrega éter de petróleo y se agita, vertiendo rápidamente al embudo de separación y tapando este a su vez para evitar se volatilice.

  5. Observamos la reacción, y se paramos las capas, para así poder observarlo al espectrofotómetro.

Observaciones y resultados

Los diversos vegetales o en este caso de frutos, poseen alguna sustancia tóxica que en determinado momento puede generar algún impacto a la salud del consumidor al rebasar las cantidades que índica el Codex alimentarius.

Conclusión

Con la técnica planteada es posible obtener información acerca de los agroquímicos empleados en el cultivo.

Bibliografía

http://plagbol.org.bo/prensa/blog/2006/11/22/varios_estudios_en_argentina_detectaron_restos_toxicos_de_plaguicidas_en_alimentos_de_gran_consumo.

PRACTICA 10

Identificación de sustancias tóxicas forenses (alcaloides)

Introducción

Los ALCALOIDES: Sustancias normalmente producidas por los vegetales con un nitrógeno en su molécula que les proporciona propiedades básicas. Los alcaloides fueron los primeros principios activos que se lograron aislar de las plantas. Se trata de sustancias biológicamente muy activas ya en pequeñas dosis, así pues si no se controla su posología pueden producir toxicidad. Los alcaloides han sido utilizados desde siempre, aunque en la antigüedad solamente con fines mágico-religiosos pues existen alcaloides que pueden llegar a producir alucinaciones, alteraciones de la percepción orgánica, etc. No en vano algunos de los más potentes estupefacientes deben su actividad a los alcaloides. Existe una gran variedad de estructuras químicas dentro de los alcaloides y ello es la causa de la gran cantidad de acciones farmacológicas diferentes que pueden ejercer. Son muchos y muy variados los ejemplos: MORFINA (procedente del OPIO). Usada en tratamientos sintomáticos del dolor, para disminuir el peristaltismo intestinal así como las secreciones bronquiales y además como calmante de la tos. COCAÍNA (procedente de la hoja de COCA). Es un excitante del sistema nervioso y un tónico que ayuda a soportar grandes fatigas. También se ha utilizado como un excelente anestésico local por su acción específica sobre los nervios periféricos. TEOBROMINA (procedente del CACAO). CAFEÍNA (procedente del CAFÉ y del TÉ). Ambos aceleran el ritmo cardíaco, disminuyen la fatiga y aumentan la diuresis. ATROPINA (procedente de la BELLADONA). Posee una acción antiespasmódica y además disminuye la secreción sudoral. También es un alcaloide la PILOCARPINA (procedente del JABORANDI) que aumenta el peristaltismo intestinal (acción contraria a la MORFINA) y produce hipersecreción sudoral (a diferencia de la ATROPINA). ERGOTAMINA (procedente del CORNEZUELO DEL CENTENO). Actualmente usado como antimigrañoso. RESERPINA (procedente de la RAUWOLFIA). Posee una acción claramente hipotensora. COLCHICINA (procedente del CÓLCHICO). Antitérmico y antidoloroso muy utilizado en casos de gota.

Objetivo


Tanto extraer como identificar que plantas contienen alcaloides y en que cantidades son tóxicos para el humano.

Material


  • Material vegetal

  • Cloroformo

  • Pinzas

  • Mechero

  • Mortero con pistilo

  • Tripie

  • Tubos de ensayo

  • Rejillas para tubo de ensayo

  • Agitador

  • Matraz Erlenmeyer.

Técnica

  1. Al material vegetal macerarlo y agregarle de 50 a 100ml de cloroformo.

  2. Hervir hasta obtener un concentrado.

  3. Obtener 1ml en el tubo de ensaye y agregar de 1-2 ml de reactivo de Duquenois levine, agitar de 1 min. en adelante

Cuantificación:

Se requiere del espectrofotómetro.


  1. A
    Partes iguales.
    cetaldehído

  2. Ácido clorhídrico concentrado

  3. Cloroformo.




  1. Añadir 1ml de ácido clorhídrico y observar una coloración rosa hasta un azul.

  2. Añadir de 2-5 gotas de cloroformo y observar el cambio de la coloración.

Observaciones y resultados

Las plantas con mayor posibilidad de encontrar alcaloides corresponde a: toloache, floripondio y huele de noche principalmente.

Conclusión

La mayoría de estas plantas contienen alcaloides en menor o mayor proporción, pero se encuentran presentes para identificarlas con la presente técnica.

Bibliografía



http://inistor.galeon.com/pagina2.htm



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