Laboratorio control bacteriológico de agua potable



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CI 51I .- CALIDAD DEL AGUA-MICROBIOLOGÍA. 28.08.2002

LABORATORIO 2. CONTROL BACTERIOLÓGICO DE AGUA POTABLE




  1. INTRODUCCIÓN

El objetivo de este laboratorio es familiarizar al alumno con los controles de calidad del agua potable y agua de las fuentes, a realizar según normas y criterios nacionales e internacionales, relacionadas con los aspectos salud pública y necesidades de tratamiento.


Los indicadores de contaminación a determinar son:


  1. Determinación de Coliformes Totales y Coliformes Fecales en una fuente de agua potable (agua cruda) por la técnica del Número Más Probable, NMP, sg. normas chilenas INN, NCh 1620/1 Of.84; NCh 2313/22 Of.95.




  1. Determinación de Bacterias Coliformes Totales y verificación de Coliformes Fecales en agua potable obtenida de la red, por la técnica de Filtración por Membranas, FM. sg. norma chilena NCh 1620/2 Of. 84.




  1. Recuento de Bacterias en Placa del agua cruda y del agua potable (clorada) en el sistema de distribución, sg. metodología estandarizada (S. Methods, 1998). Ver anexo.

Como parámetros complementarios se determinará: i) pH y Turbiedad en ambas muestras, ii) cloro residual libre en el agua clorada. iii) Unidad Estándar de Area en el agua cruda (muestra especial).


2. PROCEDIMIENTOS


      1. Coliformes Totales, NMP. Ver norma chilena NCh 1620/1 Of. 84. Parte 7. Procedimiento. Aplicar 7.1. ensayo presuntivo, a las aguas cruda, inoculando muestra sg. Tabla 1, agua no clorada. Continuar con 7.2. ensayo confirmativo. Informar resultados de acuerdo a Parte 8. Expresión de Resultados. Informar resultados, considerando datos Parte 9. Informe.




      1. Coliformes Fecales, NMP. Ver norma chilena NCh 2313/22 Of. 95. Parte 7. Procedimiento., comenzando desde 7.6.1. Ensayo confirmativo en caldo EC. Calcular resultado sg. Parte 8, e informar de acuerdo a Parte 9.



      1. Coliformes Totales, FM. Ver norma chilena NCh 1620/2 Of. 84. Parte 7. Procedimiento. En 7.1. Filtración, filtrar 100 mL de agua potable y depositar asépticamente sobre una placa conteniendo medio de cultivo sólido, e incubar sg. 7.2.1. Realizar conteo de colonias, sg. 7.3. Recuento. Cuando corresponda, realizar sg. 7.4. Verificación. Seguir con Punto 8. Expresión de Resultados. Considerar Punto 9., para preparación de Informe


Recuento de Bacterias en Placa. Ver anexo 1. (Manual de Métodos para el Análisis Bacteriológico de Aguas. Publicación SENDOS 0479, capítulo 8, pág 172


      1. Determinación de cloro residual libre. Aplicar método DPD, sg. Manual Métodos Análisis Físico-Químicos de agua potable, Superintendencia de Servicios Sanitarios (1997). Ver Anexo 2.


2.1.5 Determinación de la Unidad Estandar de Area. (Standard Methods, 1998) Ver Anexo 3.

TRABAJO PRÁCTICO


    1. Determinación de Coliformes Totales, Técnica NMP.

Agua Cruda: Aplicando la técnica descrita en la norma NCh 1620/1, inocular 5 tubos x 4 diluciones, (10mL, 1mL, 0,1mL y 0,01mL).

  • Nota: Usar medio de cultivo de doble concentración para inoculación de 10 mL de muestra.

    1. Determinación de Coliformes Totales Técnica FM.

  1. - Recolectar alrededor de 200 mL de agua potable de una llave del laboratorio, según lo

descrito en Manual de Métodos para el Análisis Bacteriológico de Aguas. Publicación

SENDOS 0479, capítulo 5, pág. 61. Continuar sg. Norma NCh 1620/2, filtrando un volumen

de 100 mL de muestra.

3.3 Determinación del Recuento de Bacterias en Placa


  • Agua cruda, sembrar diluciones 1/10, 1/100 y 1/1000 mL de muestra.

Agua potable, sembrar 1 mL de muestra directa. Manual de Métodos para el Análisis Bacteriológico de Aguas. Publicación SENDOS 0479, capítulo 8, pág. 172.


    1. Realizar mediciones de pH, Turbiedad, y cloro residual, este último cuando corresponda.




    1. Identificar los géneros de algas encontrados y Determinar las Unidades Estandar de Area de en el agua cruda (Muestra especial).



  1. INFORME FINAL

Preparar un informe incluyendo la siguiente información




    1. Introducción.

    2. Materiales: tipo de agua, origen, muestreo.

    3. Breve descripción y fundamento del método usado; bases de selección, ventajas y limitaciones.

    4. Resultados de parámetros bacteriológicos, incluyendo límites de confianza, cuando corresponda.

    5. Comentarios sobre la calidad bacteriológica del agua de la fuente p/v sanitario; calificación de la fuente y del agua potable en el sistema de distribución, sg. normas nacionales.

    6. Interpretación del significado sanitario de las algas identificadas y calificar el agua de la fuente sg. UEA/mL. encontradas.

Otros antecedentes que considere de interés.

    1. Bibliografía consultada para la preparación del informe.


Literatura de Consulta


  1. Manual de Métodos para el Análisis Bacteriológico de Aguas. Publicación SENDOS 0479, capítulos 5,6,7,8.

  2. Standard Methods for the examination of water and wastewater. American Public Health Association. 20th ed, 1998.

  3. Membrane Filtration for Total Coliform and Fecal Coliform population in Water. E.E. Geldreich. USEPA, in Membrane FilterTechniques in Microbiology. Ed. B.B. Dutka, CCIW, 1979.

  4. Norma Chilena Agua Potable. NCh 409 Of.84, INN. Norma Chilena Fuentes de Agua Potable. NCh 777 Of.71, INN

  5. Guías para la calidad del agua potable. OMS. 1995. Vol 1. Aspectos microbiológicos.

  6. Manual for the Certification of Laboratories Analyzing Drinking Water. Criteria and Procedures. Chapter V: Microbiology. 4 Ed. 1997. USEPA 815-B-97-001. http://www.epa.gov/OGWDW/certlab/Labfront.htmL#toc

Anexo 1. RECUENTO DE BACTERIAS EN PLACA

Anexo 2. DETERMINACIÓN DE CLORO RESIDUAL LIBRE
Anexo 1. RECUENTO DE BACTERIAS EN PLACA
El Recuento de Bacterias en Placa es un indicador no selectivo de calidad microbiológica de aguas, muy utilizado para determinar el nivel trófico de las aguas; además es de gran utilidad para tener información sobre la higiene del agua.
Consiste en la siembra de un volumen determinado de agua en un medio de cultivo conteniendo nutrientes. Tanto el medio nutriente, usado para el cultivo, como la temperatura y el periodo de incubación han sido estandarizados (Standard Methods, 1998).
En este laboratorio se usará la técnica de siembra por mezclado. Para ello, abrir levemente una placa de petri estéril de 100 x15 mm, depositar en el fondo de ella 1 mL de muestra directa o diluciones (pero siempre en volumen de 1 mL) y luego agregar 15 mL del medio de cultivo sólido estéril, fundido. Cerrar la placa, agitar suavemente para homogenizar; dejar solidificar a temperatura ambiente y luego incubar a 35°C±0.5°C durante 48 h. Como medio de cultivo usar Agar R2A; como medio de dilución usar agua tamponada de dilución descrita en metodología NCh 1620/1 Of.84.


Anexo 2. DETERMINACIÓN DE CLORO RESIDUAL LIBRE EN AGUA POTABLE

TÉCNICA COLORIMÉTRICA DPD COMPARADOR HACH 2231



Fundamento: El cloro libre reacciona instantáneamente con el reactivo DPD (N,N´-dietil-p-

Fenilendiamina) produciendo un color fucsia.


Procedimiento.
1.- Llenar el tubo hasta la primera marca (5 mL) con la muestra de agua. Este tubo corresponde al blanco.

2.- Colocar este tubo en la abertura superior izquierda del comparador.

3.- Llenar otro tubo hasta la primera marca (5 mL) con la muestra de agua.

4.- Agregar el contenido de un sobre del reactivo de cloro libre de DPD en el segundo tubo de los preparados anteriormente. Realizar el análisis y leer el resultado tras un minuto de la adición del reactivo DPD.

5.- Agitar para mezclar.

6.- Colocar el segundo tubo en la abertura superior derecha del comparador.

7.- Orientar el comparador hacia una fuente de luz, tal como el cielo, una ventana o una lámpara. Mirar a través de las aberturas frontales del comparador.

8.- Girar el disco de color del comparador hasta que el color coincida en ambas aberturas.

9.- Leer los mg/L de cloro residual libre en la ventanilla de la escala.
Notas.

i) Los tubos a usar en el análisis deben estar limpios, y exentos de restos de reactivo.

ii) Para abrir el sobre con reactivo: golpear suavemente la parte inferior del sobre; tirar de la línea de puntos para abrir; una vez abierta, presionar los lados del sobre para formar una especie de embudo de salida; agregar el contenido del sobre a la muestra.

iii) La exactitud del análisis no se verá afectada por restos de polvo del reactivo sin disolver.




Anexo 2. DETERMINACIÓN DE UNIDADES ESTANDAR DE AREA (MICROSCOPÍA)
Introducción
Una de las formas para estimar la densidad de algas en el agua es la determinación de una unidad convencional conocida como “Unidad Estándar de Área”, que incluye la superficie ocupada por los microorganismos en el campo del microscopio. Dicha área equivale a la ocupada por un cuadrado de 20 x 20 micrones por lado, o sea 400 micrones cuadrados.
1 UEA = 400  2

Procedimiento
Introducir 1 mL de muestra previamente homogeneizada en una cámara de Sedgwick Rafter, cubrir con la lámina cubreobjeto, evitando dejar atrapadas burbujas de aire.
Dejar reposar unos minutos, y colocar en la platina del microscopio. Verificar que el objetivo del microscopio cuente con el reticulado de Whipple. Escoger el objetivo adecuado (generalmente 10x o 20x), enfocar y proceder a contar como unidades los cuadrados (1x100 del reticulado de Whipple) ocupados totalmente por las algas y como fracción de unidad, los cuadrados parcialmente llenos.
Contar como mínimo 10 campos. Para calcular la concentración de organismos en la muestra original utilizar la siguiente fórmula:

A x C


UEA/mL = ------------------------ donde,

F x 4002 x D x K


A = Nº total de cuadrados llenos

C = área ocupada por un cuadrado (1/100) de Whipple, que se conoce a través de la

calibración del microscopio

F = Nº total de campos contados

D = Profundidad de la cámara, que en la de S.R. equivale a 1 mm

K = factor de concentraciónde la muestra


Ejemplo: Se examina una muestra de agua que fue concentrada de 1 litro a 250 mL (factor de concentración 4), con ocular de 10x y objetivo de 10x. Se obtiene un total de 600 cuadrados (1/100) ocupados por algas, en 10 campos del microscopio. Valor de 1 cuadrado (1/100) del Whipple para la combinación de ocular/objetivo usado = 10.000
600 x 10.000

UEA/mL = -------------------------------- = 375



10 x 400 x 1 x 4

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