I introducción



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  • Sangre de ave, recolectada en la granja Avícola Gracias a Dios, Los Brasiles, Managua

Una vez recolectada la muestra se procedió a secar la sangre en una gasa estéril a temperatura ambiente, para posteriormente ser utilizada en el montaje del método de Lattes.

Momento 2: Montaje de la técnica de Lattes

Una vez preparado todos los materiales y equipos necesarios para el análisis se procedió ha realizar los montajes el día 12/03/03 a las 10.00 a.m, para realizar las pruebas de los estudios pertinentes.

A) Primera Prueba:

Se prepararon las suspensiones de eritrocitos al 2% de sangre humana (A, B, AB, O) y se montaron controles de estas suspensiones para verificar su viabilidad. Se montaron cuatro placas rotuladas con A, B, AB y O y las especies a la que pertenecen las manchas. Se colocaron las manchas en cada placa y luego se les agregaron dos gotas de las suspensiones de eritrocitos respectivamente, se pusieron las placas ( porta objetos) en cámara húmeda ( consisten en poner dentro de un plato pétri un papel filtro y humedecerlo con soluciones salinas al 0.9% se colocan dos trozos de hisopos para evitar el contacto de las pacas, con el medio liquido), luego se dejaron durante 15 minutos a temperatura ambiente, pasado este tiempo se procedió a observar al microscopio ( con el objetivo 10x) y se registraron los resultados.

B) Segunda prueba:
En esta segunda prueba del montaje de la técnica, se dejaron las cámaras húmedas en incubación a ocho grados centígrados por 24 horas, pasado este tiempo se observó nuevamente en el microscopio y se anotaron los resultados.
Este proceso se realizó durante siete días, preparando las suspensiones de eritrocitos A, B, AB y O al 2% cada dos días.

7.3.2 Método de Observación:

Permitió verificar de forma directa las reacciones que se dieron entre los diferentes tipos de sangres liquida humana con sangre seca de las especies animales, permitiendo establecer parámetros de comportamientos de la sangre de las especies ensayadas.

7.4- Materiales

Suspensión de sangre humana al 2 %, 10 ml de cada grupo

Sangre de ganado, bovino, equino, así como de especies caninas y aviar, 10 ml puesto a secar en gasa.

Portaobjetos........................................................ 3′ x 1′

Cubreobjetos.......................................................22 x 22 mm

Pipetas...............................................................50 µl

Lápiz Cristalografos

Platos pétri………………………………………... 90 x 24 mm

Papel filtro..........................................................110mm x 100 de circunferencia

Hisopos……………………………………………. mango de madera doble

Agua destilada

Tubos de ensayo …………………………………12 x 75 mm

Solución salina al 0.9 %

Pinzas de acero inoxidable

Tijeras de acero inoxidable

7.5.-Equipos
Microscopio Leica DMLS, Binocular de 4 objetivos (4x, 10x, 40x y 100x). En nuestro estudio solo utilizaremos el objetivo 10x.
Centrifuga Clay Adams. De 3500 rpm, tiempo máximo de 5 minutos. Rotor con capacidad de 12 tubos de ensayos de 12 x 75 mm.
Refrigerador Sanyo. Temperatura de 1 a 5 grados centígrados.
VIII.- ANALISIS DE RESULTADOS
A continuación se presenta el análisis, obtenido al aplicar la técnica de Lattes en sangre líquida humana con sangre seca de algunas especies animales.

8.1.- REACCION DE SANGRE LIQUIDA HUMANA CON SANGRE SECA DE VACA.


En relación a la reacción de la suspensión de eritrocitos humanos “A”, con sangre seca de vaca, se observó que no hubo reacción antígeno-anticuerpo, obteniendo un cien por ciento de reacciones negativas, tanto en la observación a los quince minutos como a la realizada a las veinticuatro horas.

En los demás grupos sanguíneos (B, AB y O) se observó aglutinaciones, pero con diferencias en relación a los 15 minutos y a las 24 horas.


A los 15 minutos el tipo sanguíneo “B”, presento reacción positiva del 28.57 % y una reacción del 85.7 %, el grupo sanguíneo “AB” presento una reacción positiva de

42.85 % y una reacción negativa de 57.1 %, el grupo sanguíneo “O”, presento una reacción positiva del 28.57 % y una reacción negativa del 71.4 %.


A las 24 horas el grupo “B y AB”, presentaron reacciones positivas 14.2 % y reacciones negativas del 85.7 %, el grupo “O”, presento reacciones positivas del 28.57 % y reacciones negativas del 71.4 %.

De forma general existen diferencias de reacciones, a excepción del grupo “A” que fue estable, por lo que no se puede establecer un patrón de comportamiento entre las reacciones. (Ver tabla No. 1 y gráfica 1 y 2).

TABLA No. 1


PORCENTAJES DE REACCIONES POSITIVAS Y NEGATIVAS


Especie

Animal


Sangre Humana

Reacción a los 15 minutos

Reacción a las 24 hrs

Vaca





+

-

+

-




F

%

F

%

F

%

F

%

A

0

0

7

100

0

0

7

100

B

2

28.57

5

71.4

1

14.2

6

85.7

AB

3

42.85

4

57.1

1

14.2

6

85.7

O

2

28.57

5

71.4

2

28.57

5

71.4

F: frecuencia de reacción.


Gráfica No.1 Reacciones (+ y -, en intervalo de 15 minutos) de la sangre líquida humana con sangre seca de vaca.

Gráfica No.2 Reacciones (+ y -, en intervalo de 24 hrs.) de la sangre líquida humana con sangre seca de vaca.




8.2.- REACCION DE SANGRE LIQUIDA HUMANA CON SANGRE SECA DE PERRO.


A los 15 minutos la reacción de la sangre tipo “A” humana con sangre seca de perro, se observo que una reacción positiva del 71.4 % y una reacción negativa del 28.57 %, el tipo de sangre “B”, presento una reacción positiva del 28.57 %, y una reacción negativa del 71.4 %, el tipo sangre “AB”, presento una reacción positiva de 42.85 % y un reacción del 57.1 %, el tipo de sangre “O” presento una reacción positiva de 14.2 % y una reacción negativa de 85.7 % .
A las 24 horas la reacción de la sangre tipo “ A ”, humana con sangre seca de perro, se observo una reacción positiva del 57.1 % y una reacción negativa del 42.85 %, el tipo de sangre “B”, presento una reacción de 42.85 % y una reacción de 57.1 %, el tipo “AB” , presento una reacción positiva del 57.1 % y una reacción negativa del 42.85 %, el tipo “O” , presento una reacción positiva de 28.57 %, y una reacción negativa del 27.1 %.
En este caso las reacciones son completamente diferentes por lo cual no se puede establecer un patrón de comportamiento. (ver tabla No.2, gráficas 3 y 4)

TABLA No. 2


PORCENTAJES DE REACCIONES POSITIVAS Y NEGATIVAS


Especie

Animal


Sangre Humana

Reacción a los 15 minutos

Reacción a las 24 hrs

Perro





+

-

+

-




F

%

F

%

F

%

F

%

A

5

71.4

2

28.57

4

57.1

3

42.85

B

3

42.85

4

57.1

3

42.85

4

57.1

AB

3

42.85

4

57.1

4

57.1

3

42.85

O

1

14.2

6

85.7

2

28.57

5

71.4

Gráfica No.3 Reacciones (+ y -, en intervalo de 15 minutos) de la sangre líquida humana con sangre seca de Perro.



Gráfica No.4 Reacciones (+ y -, en intervalo de 24 hrs) de la sangre líquida humana con sangre seca de Perro.



8.3.- REACCION DE LA SANGRE LIQUIDA HUMANA CON SANGRE SECA DE POLLO

La sangre de los tipos “ A, B y O”, reaccionaron de forma similar tanto a los 15 minutos como a las 24 horas, presentando una reacción positiva del 0 %, y una reacción negativa del 100%, la sangre del tipo “AB”, presento una reacción positiva de 14.2 % y una reacción negativa de 85.7 % tanto a los 15 minutos como a las 24 horas.
Los valores positivos y negativos de estas reacciones se mantienen constante tanto a los 15 minutos como a las 24 horas siendo la única especie que puede dar un patrón de comportamiento.

Se debe de tomar en cuenta que la sangre estudiada pertenece a pollo de engorde, a los cuales se les administra gran cantidad de antibióticos los cuales disminuyen la capacidad de los anticuerpos de reconocer sustancias extrañas en este caso los antìgenos de la sangre humana.

TABLA No. 3
PORCENTAJES DE REACCIONES POSITIVAS Y NEGATIVAS


Especie

Animal


Sangre Humana

Reacción a los 15 minutos

Reacción a las 24 hrs

Pollo





+

-

+

-




F

%

F

%

F

%

F

%

A

0

0

7

100

0

0

7

100

B

0

0

7

100

0

0

7

100

AB

1

14.2

6

85.7

1

14.2

6

85.7

O

0

0

7

100

0

0

7

100

Gráfica No.5 Reacciones (+ y -, en intervalo de 15 min) de la sangre líquida humana con sangre seca de Pollo.



Gráfica No.6 Reacciones (+ y -, en intervalo de 24 hrs) de la sangre líquida humana con sangre seca de Pollo.

8.4.- REACCIÒN DE LA SANGRE LIQUIDA HUMANA CON SANGRE SECA DE CABALLO.

A los 15 minutos la sangre del tipo “A” humana con la sangre de caballo presentó una reacción positiva del 42.85 % y una reacción negativa de 51.1 %, la sangre tipo “B, AB, y O”, presentaron reacciones positivas de 57.1 % y reacciones negativas de 42. 85%.
A las 24 horas la sangre tipo “A”, se mantuvo constante que la reacción observada a los 15 minutos, la sangre tipo “B”, presento una reacción positiva de 28.57 % y un reacción negativa de 71.4%, la sangre tipo “AB”, presento una reacción positiva de 51.7%, y una reacción negativa de 42.85%, la sangre tipo “O”, presento valores similares a la sangre tipo “B”.
Es importante destacar que las reacciones positivas “B, AB y O”, fueron constantes a los 15 minutos presentando diferencias a las 24 horas.
El posible factor que interfiere en los resultados de estas reacciones, es el cambio de suspensiones de eritrocitos humanos (antígenos), ya que se estaba trabajando con la misma mancha de sangre animal pero con diferente sangre del tipo “ A, B ;AB y O”.

TABLA No. 4


PORCENTAJES DE REACCIONES POSITIVAS Y NEGATIVAS


Especie

Animal


Sangre Humana

Reacción a los 15 minutos

Reacción a las 24 hrs

Caballo





+

-

+

-




F

%

F

%

F

%

F

%

A

3

42.85

4

57.1

3

42.85

4

57.1

B

4

57.1

3

42.85

2

28.57

5

71.4

AB

4

57.1

3

42.85

4

57.1

3

42.85

O

4

57.1

3

42.85

2

28.57

5

71.4

Gráfica No.7 Reacciones (+ y -, en intervalo de 15 min) de la sangre líquida humana con sangre seca de Caballo.



Grafica No.8 reacciones (+ y -, en intervalo de 24 hrs.) de la sangre líquida humana con sangre seca de Caballo.



Reacción Negativa (No aglutinación) observada

En el método de Lattes, de sangre humana con

Sangre Animal. Microscopio Leica 40x




Reacción Positiva (Aglutinación) observada en

Método de Lattes, de sangre humana con sangre

Animal, Microscopio Leica 40 x


I X.- CONCLUSIONES



  1. La sangre humana y la sangre animal, presentan diferencias de concentraciones en sus componentes, en el siguiente cuadro se resaltan algunas de ellas.



Elementos

Sangre Humana

Sangre Animal

Plasma

Líquido amarillento e incoloro

Es incoloro pero su tonalidad varia según la especie.

Glóbulos rojos



Diámetro de 7.2 micras, grosor 2.4 micras en la periferia y una micra en el centro.

Periodo de vida 120 días en circulación



Diámetro de 7 a 8.4 micras, varia de forma y tamaño según su especie.

Periodo de vida varia según la especie



Glóbulos blancos

Van de 4000 a 11000 leucocitos por mm cúbicos de sangre.

Varían su cantidad según la especie.

Plaquetas

Van de 150.000 a 500.000 mm cúbicos de sangre.

Varían según la especie


  1. La utilización del método de Lates para la determinación de la especie en las reacciones de sangre líquida humana (antígeno), con sangre seca (anticuerpo), de algunas especies animales tales como: sangre de vaca, sangre de perro y sangre de caballo, no es viable. Ya que los resultados de las reacciones presentan muchas variaciones por lo que no es posible establecer patrones de comportamiento.



  1. La sangre seca de pollo, con sangre líquida humana, presentó uniformidad en las reacciones de todos los grupos sanguíneos. Este patrón de reacción puede confundirse con los resultados que se obtienen al tipificar una mancha de sangre humana del tipo sanguíneo “AB”.

X.- RECOMENDACIONES

De acuerdo a los resultados se hacen las siguientes recomendaciones:

1.- Tomar en cuenta los resultados del comportamiento de sangre líquida humana con sangre seca de de algunas especies animales, tales como vaca, perro, caballo y pollo, para futuros estudios, realizando estos ensayos con un margen mayor de tiempo.


2.- Realizar la prueba de CHISTOVICH HUCHLENHUT, en manchas que se presume que son de sangre humana, o que se encuentren en prendas de vestir, ya que cabe la posibilidad de ser sangre animal o una mezcla de sangre humana con sangre animal. Si se utiliza el método de Lattes, para tipificar los grupos sanguíneos resultan las mismas posibilidades de reacción positivas y negativas de esta investigación.
3.- Se puede trabajar una mancha de sangre animal, hasta los 20 días ya que los anticuerpos presentes en esta, todavía son viables para su estudio, si se realiza la prueba de CHISTOVICH HUCHLENHUT.
XI- Bibliografía

Folletos de post-grado en biología forense, Septiembre 23 – 2002 – 15

de…Marzo 2003

Manual Básico de criminalistica I, Republica de Nicaragua

Ministerio publico Biblioteca básica. Proyecto de fortalecimiento institucional Checchi USAID 2002

Montiel Sosa Juventino (1990). Manual de Criminalística I. Editorial, ciencia y

Técnica.

Folleto de Post-Grado de Biología. (2002-2003) Sangre y Componentes Seguros



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