Dedicatorias



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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL


ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA






SECCIÓN DE ESTUDIOS DE POSGRADO E INVESTIGACIÓN

Efecto de clobenzorex y melatonina sobre la expresión génica y

actividad enzimática de NADPH oxidasa y óxido nítrico sintasa en personas obesas”


T E S I S

QUE PARA OBTENER EL GRADO DE

MAESTRÍA EN CIENCIAS DE LA SALUD


PRESENTA:


M. C. y P. NUMINE GIL SANTOS


DIRECTORE S:



DR. en C. ÁNGEL MILIAR GARCÍA

DRA. en C. JESSICA ELENA MENDIETA WEJEBE

MÉXICO D.F., ENERO DE 2012





DEDICATORIA



A MIS HIJOS

Por ser mis mas grandes tesoros pero sobre todo por generar en mi la gran inspiración y motivación para poder brindarles lo mejor, sé que esto quizá implico menos tiempo en convivencia pero el amor hacia ustedes se incremento, espero me entiendan he querido inculcar en ustedes el sentido del esfuerzo, pues lo mas sencillo hubiese sido abandonar esta meta pero no lo hice pues les tengo que rendir cuentas a ustedes (mis dos enanos), gracias amores por estar a mi lado.



A MI ESPOSO

Por caminar a mi lado, por ser el cómplice de mis locuras pero sobre todo por transmitirme la calma que en muchas ocasiones llegue a perder, por ser la parte que me complementa, por estar con nuestros hijos y hacer la función de mamá cuando no estoy, por esto y mucho más te estaré infinitamente agradecida pues sin tu ayuda creo no hubiese resultado.



A MI MAMÁ

Gracias madre por creer en mí, por ser el respaldo que necesito, por enseñarme a ser incansable, a dividir mi tiempo para cubrir con todas mis obligaciones, por ver a mis hijos como los propios, por todo el apoyo que me brindas día con día, sin estos grandes detalles esto no lo hubiese logrado.



A MI PADRE

Se presentaron muchas diferencias pero debes de saber que mi amor por ti no ha cambiado, gracias por haberme inculcado el valor del esfuerzo, la perseverancia por saber que cuento contigo aunque en ocasiones estemos distanciados, gracias por ser mi padre.



A MIS HERMANAS (MENA, NANE, LICHIS) Y MI HERMANO JUANCHO.

Por tener el apoyo incondicional por formar parte de mi vida y mis recuerdos, especialmente a ti Mena porque siempre estas cuando te necesito espero saber recompensar tú tiempo.


AGRADECIMIENTOS

A LA DRA. JESSICA, DRA. MARTHA Y DR. MILIAR

Por guiarme en este camino por compartir un poco de su conocimiento y tiempo gracias por abrir esa gran puerta hacia la investigación y enseñarme que siempre hay algo más que hacer, pero sobre todo por las consideraciones asía mi persona.



FABI, MARTHITA, LAURA Y DULCE

Por ayudarme en todo lo que estuviese a su alcance para lograr sacar mi trabajo a flote mil gracias pero sobre todo por brindarme su amistad.


AL IPN

Por ser mi alma mater y abrir un lugar para poder realizar unas de mis aspiraciones.



ESTA TESIS SE REALIZÓ EN EL LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR Y EL LABORATORIO DE BIOFÍSICA Y BIOCATÁLISIS DE LA ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA DEL INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL. EL PROYECTO FUE DIRIGIDO POR EL DR. ÁNGEL MILIAR GARCÍA Y LA DRA. JESSICA ELENA MENDIETA WEJEBE. PARA LA REALIZACIÓN DEL MISMO, LA SUSTENTANTE CONTÓ CON EL APOYO PROPORCIONADO POR LA SECRETARÍA DE INVESTIGACIÓN Y POSGRADO (SIP) (PROYECTOS: 20111112, 20113893, 20110619) Y EL CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA (CONACYT) (BECARIO: 48674 Y PROYECTO: 84119).

CONTENIDO GENERAL


ÍNDICE.......................................................................................................

I


ÍNDICE DE FIGURAS…………………………………………………………

III



ÍNDICE DE TABLAS.................................................................................

IV



GLOSARIO...............................................................................................

V



RESUMEN.................................................................................................

VII



ABSTRACT...............................................................................................

VIII


ÍNDICE


1. INTRODUCCIÓN

111 1

1.1. Marco teórico

1

1.2. Antecedentes

3

1.2.1 Obesidad

3

1.2.2. Respuesta inflamatoria

4

1.2.3. Radicales libres

5

1.2.3.1 NADPH oxidasa

8

1.2.3.2 gp 91 phox

9

1.2.3.3 p22 phox

10

1.2.3.4 p47 phox

10

1.2.3.5 p67 phox

11

1.2.3.6 p40 phox

11

1.2.3.7 Preactivación y activación del complejo enzimático NADPH oxidasa

12

1.2.4. Sintasa de óxido nítrico (NOS)

12

1.2.5. Óxido nítrico

13

1.2.6 Daño endotelial

15

1.2.7 Clobenzorex

16

1.2.8. Melatonina

17

1.3. Justificación

19

1.4. Hipótesis

20

1.5. Objetivos

20

1.5.1. General

20

1.5.2. Específicos

20

2. MATERIAL Y MÉTODOS

22

2.1. Criterios de inclusión

22

2.2 Criterios de exclusión

22

2.3. Determinación de variables antropométricas

22

2.4. Diseño experimental

22

2.4.1. Obtención de sangre

23

2.4.2. Separación celular (eritrocitos y leucocitos)

23

2.4.3. Determinación de proteínas

24

2.4.4. Determinación de hemoglobina total

24

2.4.5 Determinación de Hb ON

25

2.4.6 Determinación de nitritos

25

2.4.7 Técnica de EPR (nadph-oxidasa)

26

2.4.8 Extracción de RNAm a partir de sangre

26

2.4.8.1 Electroforesis

27

2.4.8.2 Cuantificación de RNA total

27

2.4.8.3 PCR Retrotranscripción

27

2.4.8.4 PCR Tiempo Real Cuantificación

28

2.5. Análisis estadístico

30

3. RESULTADOS

31

3.1 Complejo Hb-NO

31

3.2 Contenido de hemoglobina

32

3.3 Contenido de proteínas

32

3.4 Nitritos

33

3.5 Actividad de NADPH oxidasa

35

3.6 Expresión génica (mRNA)

36

3.6.1 Gen NOS-2

36

3.6.2 Gen NOX-1

37

3.6.3 Expresión génica p47-phox y p22-phox

38

3.7 Parámetros Bioquímicos y Somatométricos

39

4. DISCUSIÓN

42

5. CONCLUSIONES

46

REFERENCIAS

48








ÍNDICE DE FIGURAS


Figura 1.

Componentes del sistema NADPH oxidasa en estados de reposo y activación celular

10


Figura 2.

Produccion de Radicales Libres

15

Figura 3.

Estructura Química Clobenzorex

16

Figura 4.

Estructura química Melatonina

17

Figura 5.

Fases que se forman antes y después de centrifugar con ficoll-histopaque

24


Figura 6.

Contenido de Hb-NO en pacientes obesos sin tratamiento y con tratamiento con clobenzorex-melatonina.

31


Figura 7.

Contenido de hemoglobina en pacientes obesos sin tratamiento y con tratamiento con clobenzorex-melatonina

32


Figura 8.

Contenido de proteínas en pacientes obesos sin tratamiento y con tratamiento con clobenzorex-melatonina

33


Figura 9.

Contenido de nitritos en pacientes obesos sin tratamiento y con tratamiento con Clobenzorex-melatonina

33


Figura 10.

Espectro EPR de paciente obeso

34

Figura 11.

Espectro EPR de paciente tratado con clobenzorex-melatonina

34

Figura 12.

Espectro de EPR de paciente sano

35

Figura 13.

Intensidad de actividad de enzima NADPH-oxidasa en pacientes obesos sin tratamiento y con tratamiento (clobenzorex melatonina)

36


Figura 14.

Expresión relativa de NOS 2 en obesos sin tratamiento y con tratamiento con clobenzorex-melatonina

37


Figura 15.

Expresión relativa de NOX 1 en obesos sin tratamiento y con tratamiento con clobenzorex-melatonina

37


Figura 16

Expresión relativa de p 47-phox en obesos sin tratamiento y con tratamiento con clobenzorex-melatonina

38


Figura 17

Expresión relativa de p 22-phox en obesos sin tratamiento y con tratamiento con clobenzorex-melatonina

39


Figura 18

Peso de pacientes obesos al principio y al final del tratamiento con clobenzorex y melatonina

40

Figura 19

Parametros bioquímicos (colesterol) antes y después del tratamiento con clobenzorex-melatonina

41

Figura 20

Niveles de colesterol antes y después del tratamiento con clobenzorex-melatonina

41


ÍNDICE DE TABLAS


Tabla 1.

Volúmenes para cDNA

28

Tabla 2.

Volúmenes para PCR

29

Tabla 3.

Volúmenes para normalizar con 18S

29

Tabla 4.

Parámetros Somatométricos al Inicio y al Final del Tratamiento

39

Tabla 5.

Parámetros Bioquímicos al Inicio y al Final del Tratamiento

40


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